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层析填料寿命短,多留意这些因素

更新时间:2020-12-10 点击次数:2303

 

各位小伙伴在做蛋白纯化时,是否会苦恼“诶,我用的填料咋没用几次就不行了呢”。在筛选填料时会反复的考察填料寿命。不过,各位小伙伴需要留意了,填料寿命短有可能是你在使用蛋白层析填料时这些因素没有考虑周全。

 

01 重复装柱

每次装柱的过程都涉及到填料的脱气处理,及装填柱床时的压缩柱床,然后脱气时的超声或者抽滤都会对填料施压,压缩柱床也要对填料施压,反复的施压及压力控制不当也会使填料的物理性能发生变化从而影响填料的寿命。

 

柱床被严重污染或者进气泡时,拆装清洗比CIP效果更好,更有利于填料寿命衰减的降低。

 

 

02 样品状态

 a.样品澄清度:样品越澄清对填料的寿命衰减影响越小。

 b.样品粘度:样品的粘度越小,对填料寿命的影响越小。

 c.样品酸碱度:过酸过碱都会加速填料寿命的衰减。

 d.样品离子强度:离子强度越高填料寿命衰减的越快。

 e.样品成分组成:样品成分越复杂,层析过程越复杂,填料的寿命衰减越块(这也与填料所处的工艺阶段吻合,捕获粗纯阶段填料寿命衰减的更快,精纯阶段填料寿命衰减的慢。)

 

03 层析工艺

a.柱床高度,流速及反压越大,工艺过程填料受到的外力就会增大,填料的寿命衰减就会增大。

b.层析工艺过程的缓冲液的种类及洗脱的CV数也会影响填料的寿命,缓冲液越温和对填料寿命衰减影响越小,洗脱CV数越小对填料寿命衰减影响越小。

 

04 维护保养

合理的维护保养过程可以降低填料寿命的衰减,但是维护过程的CIP及消毒过程通常都需要剧烈的条件,如强酸强碱等,所以CIP的强度及频率越大对填料的寿命衰减影响越大。

 

a.再生:恢复介质原有功能。

 b.清洗(CIP):去除填料中积累的杂质及污染物,比再生剧烈。

 c.消毒:去内毒素及微生物。

 d.保存:使用后合理保存(温度,保存液)。

 

常见的离子交换层析填料清洗

 

日常清洗

离子交换树脂每次使用后可以用 1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高 pH 溶液清洗,然后用至少 5 倍柱体积的 Buffer 进行平衡至离子强度或 pH 值稳定。

 

CIP(Cleaning In Place)清洗

离子交换树脂可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

 

去除一些沉淀或变性物质,建议使用下面的方法

 

用 2 倍柱体积的 1M NaOH 溶液进行清洗,然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

 

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

 

用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 3-4 倍柱体积的 1% Triton™ X-100 清洗,然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

 

去除一些离子键结合物质

 

用 3-4 倍柱体积的 2M NaCl 清洗,然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

 

 

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